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川楝子醇提物体外肝细胞毒性研究

时间:2017-11-22 12:00:04 来源: 代写硕士论文

【摘要】目的:考察川楝子醇提物体外细胞毒性。方法:将川楝子醇提物倍比稀释后与小鼠肝细胞接触培养,通过显微镜观察其形态,采用MTT法量化细胞毒性,计算相对增殖率。结果:川楝子醇提物对肝细胞的生长抑制作用无统计学差异(P>0.05),川楝子醇提物肝细胞毒性级别为0级。结论:川楝子醇提物无明显的肝细胞毒性。
【关键词】川楝子醇提物;细胞毒性; MTT法
川楝子(FructusToosendan) 是临床常用中药。据《中国药典》2010 年版所载为楝科植物川楝 (Melia toosendanSieb. et Zucc.) 的干燥成熟果实,有肝小毒。本文用MTT法考察川楝子醇提物对肝细胞的毒性程度。
        1 材料与方法
        1.1材料与试剂。    小鼠,1640培养液,小牛血清,噻唑蓝,CO2恒温培养箱,酶标仪,显微镜。
        2 实验方法
        2.1供试品溶液制备:用含10%血清的1640培养基将供试品稀释至所需浓度。
        2.2细胞接种:用机械分离法,将小鼠肝脏剪碎,研磨,使肝细胞从肝组织上脱落,获肝细胞,制成单个细胞悬液。用含10%血清的1640培养液种植消化并稀释,将细胞密度调整为1×106个/ml,接种到96孔培养板,每孔接种200μl细胞悬液。置CO2培养箱37℃培养使细胞贴壁24h。
        2.3 MTT法:取8ml供试品,倍比稀释成6个不同浓度。设细胞对照组和6个不同浓度供试品组(从高到低浓度依次为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组),每组8个复孔。在各孔中分别加入100μL培养液及100μL不同浓度的供试品稀释液,置CO2培养箱继续培养72h。置显微镜下观察细胞形态(图1)。每孔加入MTT溶液50μL,37℃孵育4h。置显微镜下观察细胞形态(图2)。弃去孔内培养基和MTT溶液,再加入DMSO 200μL,混匀10min,采用酶标仪,在492nm和630nm处分别测定吸光度A值,用各孔A492nm-对应孔A630nm,取平行4孔差值计算各组平均值。按下式计算细胞相对增殖率:
细胞相对增殖率(RGR)=A/A0×100%
        式中:A为供试品组吸光度;A0为细胞对照组吸光度均值。
        2.4 统计方法。  实验数据采用SPSS11.0统计处理,计量数据A值以(X±s)表示,采用t检验进行比较。
        3 结果
        3.1 细胞形态学观察。   显微镜下观察,肝细胞呈贴壁生长,细胞多呈圆形、三角形、梭形,胞浆丰富,细胞核有单或双核,呈圆形或椭圆形。在每孔加入MTT溶液37℃孵育4h后,细胞生长密集,其形态和核相均没有发生改变。结果见图1 、图2。    


     注:与细胞对照组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

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