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2010年郑州地区腹泻患儿A组轮状病毒VP4基因型初步研究

时间:2017-11-21 16:00:11 来源: 代写硕士论文

                                  作者:王艳丽 程艳波 李春力

【摘要】目的 研究郑州地区秋冬季婴幼儿腹泻A组轮状病毒的VP4分子基因分型。方法  收集郑州第一人民医院儿科2010年9-12月住院的腹泻患儿的粪便标本80份,采用TRIzol方法抽提大便中的核酸,酶联接免疫吸附剂测定方法(ELISA)检测轮状病毒基因组,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法以及巢式聚合酶链反应法(net-PCR)PCR法进行轮状病毒的VP4基因分型。结果  80份粪便标本中,40份检测到A组轮状病毒RNA基因,阳性率为50%,对40份标本进行VP4基因分型研究,P8型为33例(82.5.%),P6型6例(15%),P8和P6混合感染型1例(2.5%),未发现其他型。结论  郑州地区A组RV以P8型为主要流行基因型,并发现P6和P8混合型.
【关键词】轮状病毒  VP4  基因型  腹泻  婴幼儿
【Abstract】objective To characterize the molecular epidemiology of rotavirus infection and the distribution of P genotype of rotavirus in ZhengZhou.Methods Stool samples were collected from80 children who were hospitalized in the Department of Peadiatric, the First Peoples Hospital of ZhengZhou from september to november in 2010. TRIzol  was used to detect rotavirus genemic RNA and ELISA was used to identify of group A rotavirus. Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and nest polymerase chain reaction(net-PCR) were performed to identify rotavirus P genotypes. Results Out of 80 samples investigated, 40 were identified A rotavirus,and genotyped P8 predominated in the all kinds of strains(77.5%) .4 were P6(10%).  1 was mixed infection of type p6 and P8(2.5%). other genotypes were not detectable. Conclusion P8 was the main prevalent type inZhengZhou .and it discovered the new prevalent mixed infection of type P8 and P6
【Keywords】rotavirus   genotype   VP4   diarrhea   infantile
        无论在发展中国家和发达国家,轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的最主要原因 [1]。利用血清学方法,RV分为七个不同的组(A组~G组),其中A、B、C组轮状病毒能够感染人,特别是A组RV是世界范围内婴幼儿重症腹泻的最重要的病原体,是引起婴幼儿死亡的主要原因[2]。其中VP4是组成RV的对蛋白酶敏感的非糖基化蛋白,基因全长为2359bp,由755个氨基酸组成[3],VP4蛋白酶敏感蛋白决定P血清型,P基因型分型较复杂,用重组的从不同的G血清型得到的VP4蛋白诱导产生中和抗体对不同的人类毒株进行中和试验,将RV的VP4蛋白分为P1A、P1B、P2、P3、P4等血清型。VP4的基因分型与血清分型有一定的关系,目前至少有11个P血清型及20多种P基因型。引起婴幼儿腹泻的血清型多为P8、P4型[4]。本研究选择常见的5种A 组轮状病毒VP4基因型(P基因型)特异引物,采用RT-PCR及net-PCR技术对郑州地区婴幼儿A组RV腹泻进行了P基因型的分子流行病学研究,现报道如下。
        1  材料和方法
        1.1 材料
        2010年9月-2011年1月收集郑州市第一人民医院儿科住院腹泻患儿标本80份,符合以下临床诊断标准[5]:大便次数增多,呈水样、蛋花汤样便或黏糊状、黄绿色稀便,无粘液及血。标本存于-70℃冰箱备用,详细记录每例患儿腹泻的临床经过以及有无呼吸道感染症状。
        1.2 RV的RNA提取及检测
        采用TRIzol方法抽提大便悬液中的核酸,酶联接免疫吸附剂测定方法(ELISA)检测轮状病毒基因组,对于阳性较干燥标本用PH值=7.6的Tris液稀释为10%,取上清用病毒/液体样品的RNA/DNA抽提试剂盒(购自上海华舜工程有限公司)抽提RNA,用30ul无菌水融解RNA以备用。
        1.3 轮状病毒VP4的分型
        轮状病毒毒株分型采用轮状病毒国家标准检测方案,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法以及巢式聚合酶链反应法(net-PCR)PCR法基因分型,引物详见文献[6-8](以上所用试剂以及引物合成均购自大连宝生物有限公司)。
        2  结果
        2.1 病毒检测结果以及病毒感染的年龄和性别分布
        通过ELISA方法检测结果显示80份粪便标本中A组RV阳性样本为40份,阳性率为50%,40份阳性标本中年龄在6个月~36个月之间平均年龄11.7月。其中7~15个月患儿感染占32例,占80%,24月至36个月3例,占7.5%,小于6个月患儿5例,占12.5%。男性患儿为26例,女性患儿为14例,男女之比为1.9:1。
        2.2 病毒G血清型分型结果 
        对40份阳性标本进行VP4基因分型研究,P8型为33例(82.5%),P6型6例(15%),P8和P6混合感染型1例(2.5%),未发现其他型。
        2.3 病毒血清型与呼吸道感染
        在40份阳性标本中合并有呼吸道感染的7例,均为P8型。
        3  讨论
        自1973年Bishop等首次发现轮状病毒以来,关于轮状病毒感染的研究越来越深入。据世界卫生组织调查5岁以下每年大约有527,000患儿死于轮状病毒感染[9]。据统计,在我国2004年因腹泻死亡的患儿有77,000[10]。虽然大部分死亡病例出现在发展中国家,但即使在卫生条件好、水质洁净的发达国家,这种疾病也有一定的发病率,这相当大的死亡率和对国家带来的经济负担要求必须有效的控制措施,传统的公共卫生干预措施在控制RV感染是无效的,目前控制轮状病毒感染有效的方法就是轮状病毒疫苗的研制。

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