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死亡受体DR5在急性非淋巴细胞白血病细胞中的表达及其临床意义

时间:2017-10-23 09:00:08 来源: 代写硕士论文

                    作者:王一苇 孙秉中 张涛 朱华锋 胡佩珍 张传山 

【关键词】  死亡受体
    关键词: 死亡受体;脱噬作用;受体,细胞表面;白血病,非淋巴细胞,急性;死亡区域
     
    摘 要:目的  探讨死亡受体DR5在急性非淋巴细胞白血病(ANLL)细胞中的表达及其临床意义. 方法  培养Jurkat,NB4细胞和抽取ANLL患者的骨髓细胞,分离出单个核细胞,用免疫组织化学染色的方法测定DR5的阳性表达率,所选病例进行诱导化疗后,研究DR5的阳性表达率与诱导化疗结果的关系. 结果  DR5的阳性表达率在Jurkat细胞中为98%,阳性物质主要分布在胞质及胞膜中;而在NB4细胞中则为81%.不同ANLL患者的DR5阳性细胞的百分率存在较大的差异,其中最高达94%,最低为45%.ANLL患者的DR5阳性表达率与诱导化疗后骨髓涂片的原始和幼稚细胞比例呈负相关,与诱导化疗后的缓解率呈正相关;DR5的阳性表达率与ANLL分型无明显相关. 结论  该结果对ANLL诱导化疗后的疗效判定有一定的参考价值.
      
  Keywords:death receptor;apoptosis;receptors,cell sur-face;leukemia,nonlymphocytic,acute;death domain
     
  Abstract:AIM To reveal the expression of death receptor5(DR5)in the cells of acute non-lymphocyte leukemia(ANLL)and its clinical significance.METHODS ANLL cell line Jurkat and NB4cells were cultured.Bone marrow cells of ANLL patients were separated.The expressions of DR5in these cells were observed by using immunohis-tochemical staining method.Inducing chemotherapy was giv-en to all cases to study the relationship between DR5positivi-ty rate and inducing chemotherapy results.RESULTS DR5positivity rate was98%in Jurkat cells with positive signals mainly located in membrane and cytoplasm,81%in NB4cells,and significantly different in ANLL patients,ranging from94%to45%.DR5positivity rate was negatively corre-lated with ratio of primary cell to infantilism cell,and posi-tively correlated with complete remission rate after inducing chemotherapy,and was not significantly correlated with AN-LL clinical types.CONCLUSION The results might provide clinical significance for assessing the therapeutic effects of in-ducing chemotherapy for ANLL.
     
  0 引言
     
  死亡受体(Death Receptor)结构上属于肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族成员,是与相应配体结合后可导致死亡受体表达细胞凋亡的一类跨膜受体[1] ,包括Fas,TNFR1,DR3,DR4,DR5等.DR4与DR5共用的配体 TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是新近发现的一类TNF超家族成员.TRAIL可以选择性杀伤突变细胞而不杀伤正常细胞,但必须以和DR结合的方式发挥其特有的功效[2,3] .其中DR5在正常组织中表达较广泛,如睾丸、卵巢、结肠、小肠,肝、脑、肺、脾和外周血白细胞等均有表达.近来有研究报道DR5在某些肿瘤细胞中有表达,其表达水平可能与瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性有关[4] ,但在急性白血病中的表达情况尚未见报道.我们就DR5在急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)细胞系和患者肿瘤细胞中的表达及临床意义进行探讨研究. 
  1 材料和方法
     
  1.1 材料  白血病细胞株Jurkat,NB4由本科实验室提供.白血病原代细胞取自本院血液科12(男5,女7)例ANLL患者骨髓细胞,患者年龄9~67(平均43±11)岁;M2 1例,M3 6例,M4 1例,M5 1例,M6 2例,M7 1例,正常对照5例.其骨髓细胞按常规制备成单个核细胞.主要试剂:RPMI-1640培养基购自西安华美生物公司,为美国GIBCO公司产品;DR5鼠抗人mAb为第四军医大学西京医院免疫学教研室惠赠;免疫组化SABC Envision试剂盒购自武汉博士德公司,为丹麦DAKO公司产品. 
  1.2 方法
     
  1.2.1 ANLL细胞系和培养条件  ANLL细胞系Jurkat,NB4在含有100mL・L-1 胎牛血清、2mmol・L-1 谷氨酰胺的RPMI-1640培养液中、37℃,50mL・L-1 CO2 、饱和湿度下培养,倒置显微镜下观察细胞形态.48~72h传代1次,调整细胞密度为5×108 ~1×109 ・L-1 ,实验选用对数生长期细胞. 
  1.2.2 骨髓单个核细胞分离  抽取ANLL患者及正常对照人群骨髓5mL(肝素抗凝),用5mL RP-MI1640培养液稀释,加于淋巴细胞分离液中(分离液与分离样品体积比为1∶1),2000r・min-1 ,离心20min,收集分离液中界面的单个核细胞,用RPMI-1640洗涤2次,调整细胞密度为5×108 ・L-1 ,待用. 
  1.2.3 免疫组化染色  ①载玻片处理:用20mL・L-1 丙酮稀释液浸泡干净玻片30min,取出干燥5min,纯丙酮涮洗2~3次,然后置无尘处干燥,封闭保存;②制备骨髓单个核细胞涂片:将分离的单个核细胞50μL滴到玻片上,铺片,丙酮室温固定10min,晾干备用;③免疫组化检测:切片经常规脱蜡至水,30mL・L-1 过氧化氢灭活内源性过氧化物酶,小牛血清封闭,鼠抗人DR5mAb(一抗)孵育,4℃过夜,其余步骤按免疫组化Envision试剂盒的说明进行.免疫组化以PBS替代一抗为空白对照,抗5-HT多抗替代一抗为阴性对照.
     
  1.2.4 结果分析  免疫组化图像输入自动图像分析仪,每张切片按随机数字法选取6个视野,计算DR5阳性表达细胞数.诱导治疗结果评定:经三尖杉酯碱(2~6mg・m-2 ,5~7d)、阿糖胞苷(100mg~200mg・m-2 ,5~7d)或柔红霉素(30~70mg・m-2 ,3d)、阿糖胞苷100~200mg・m-2 ,7d)方案治疗2个疗程后,以患者骨髓像中原始细胞加幼稚细胞的百分比作为诱导治疗结果判定标准,<5%为完全缓解,5%~30%为部分缓解,>30%为未缓解(M5 除外).

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