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细胞周期相关蛋白在肝癌细胞系HCC┐9204表达的免疫细胞化学定位

时间:2017-10-22 06:00:11 来源: 代写硕士论文

                           作者:杨连君 王文亮 司晓辉 

【关键词】  细胞周期相关蛋白
  关键词: 细胞周期相关蛋白;肝细胞癌;免疫细胞化学 
  0 引言  
  肿瘤细胞的发生和增殖与细胞周期蛋白(Cyclin)及其相关分子Cyclin依赖性蛋白激酶(CDK)和CDK抑制蛋白(CKI)的调控密切相关[1] .关于Cyclin及其调控分子在培养的原发性肝细胞癌(以下简称肝癌)细胞中表达的定位情况尚未见报道.我们采用免疫细胞化学技术检测Cyclin D1及其相关分子CDK4和CKI家族中的p27Kip1在培养的肝癌细胞系HCC-9204中的表达情况.
     
  1 材料和方法
     
  1.1 细胞来源  人肝癌细胞系HCC-9204和对照用的正常人肝细胞系QZG为本室保存.于含盖玻片的6孔板内用含100mL・L-1 新生牛血清的RPMI1640培养液培养.待细胞生长至单层时,取出玻片,PBS缓冲液洗,950mL・L-1 乙醇固定15min,再用PBS洗后4℃备用.
     
  1.2 主要试剂  鼠抗人Cyclin D1,CDK4和p27Kip1mAb均为美国Santa Cruz公司产品.DAB为美国Sigma公司产品.免疫组化ABC试剂盒为美国Vector公司产品.
     
  1.3 染色方法  ①细胞片入7.5mL・L-1 H2 O2 内,37℃,10min;②加正常羊血清,37℃,30min;③分别加鼠抗人Cyclin D1,CDK4或p27Kip1mAb,以PBS作为阴性对照,4℃过夜;④加生物素化羊抗鼠IgG,37℃,30min;⑤加ABC复合物,37℃,30min.上述各步间均用PBS洗;⑥DAB显色后脱水,透明,封片.
     
  1.4 结果判断  阳性信号为棕黄色.每个细胞片随机选取不相重叠的视野,计数300个细胞,观察其是否为阳性及其染色部位.
     
  2 结果  
  Cyclin D1,CDK4和p27Kip1在HCC-9204细胞表达的阳性率及其定位情况见表1、图1和图2.与在HCC-9204细胞中的表达情况相比,QZG细胞中的Cyclin D1和CDK4相对较弱,而p27Kip1相对较强.所有阴性对照中均为阴性.

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