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人精液中一氧化氮和γ

时间:2017-10-20 10:00:05 来源: 代写硕士论文

                   作者:杨麦贵,杨阳,郝晓柯,张竹映,郑善銮,樊爱琳,程晓东,周铁成 

【关键词】  ,一氧化氮
  
  【Abstract】AIM: To study the relationship between the nitric oxide (NO) and the γglutamyltransferase (GGT) activity of human sperm. METHODS:  Sperm routine analysis was conducted following  WHO standard. Eightynine subjects  were devided into 4 groups according to the density and activity of sperm. A coppered reduced cadmium fluometric assay was used to detect nitrate, a metablic product of nitric oxide in sperm. The activity of sperm GGT was detected by Glucana method. RESULTS:  The content of NO had a significantly negative relationship with the density, the motility rate, and GGT activity of sperms in the 89 infertile patients (r =-0.56,  -0.63, -0.71, P<0.01). CONCLUSION:  The detection of the activity of sperm GGT is an effective index to assess the capability of sperms being fertilized. NO inhibits the activity of sperm GGT and affects the maturity and motility  of sperms.
  【Keywords】 nitric oxide; gammaglutamyltransferase; sperm
  【摘要】 目的: 探讨人精液中一氧化氮(NO)与γ谷氨酰基移换酶(γglutamyltransferase, GGT)活性的关系. 方法: 参照WHO标准,进行精液常规分析,按精子密度(×109/L)、活动率(%)不同分为(正常,<20, <20~40, >40)4个组. 采用镀铜镉还原荧光法检测NO代谢产物硝酸盐(NO-3). 用以Glucana为底物动力学方法测定精液GGT活性. 结果: 89例不育者NO含量为(78.5±1.5) μmol/L,与精子密度(33.3±14.3)×109/L,活动率(33.3±14.3)%及GGT活性(203.19±35.89)×103 nkat/L呈显著的负相关(r分别为-0.56,  -0.63, -0.71, P<0.01).  结论: 精液GGT活性测定是评价附睾头部功能的重要指标,提示NO对精液GGT活性有抑制,从而灭活影响精子的成熟和运动能力. 
  【关键词】 一氧化氮;γ谷氨酰移换酶;精子
  0引言
   
  γ谷氨酰基移换酶(γglutamyltransferase, GGT)是一种广泛存在于哺乳动物体内肾、胰、肝及男性生殖系统等组织中的移换酶,尤其附睾头部活性最高,约为血中的400倍. 催化水解谷胱甘肽,生成γ谷氨酰与游离氨基酸或肽结合,实现跨精子膜转移,起细胞膜连结作用. 当附睾GGT活性降低时,可影响精子的成熟和精子的运动,因此,检测精液GGT对了解附睾头部功能有重要意义[1].  NO是生物活性物质,参与多种疾病的生理病理过程. 它分布于睾丸、附睾及输精管等组织中,对生精过程,精子活力、活率、受精能力等具有重要的调节作用[2,3]. 为探讨其两者在男性不育症中的相互关系,我们对临床119例精液样品进行了检测分析. 
  1材料和方法
  1.1材料
  正常生育组男性30例均为有生育能力的自愿献精者,年龄21~30(25.5±1.0)岁. 不育组89例,选自西京医院泌尿外科、中医科和妇产科门诊就诊患者,均为已婚同居2 a以上,性生活正常不育者(排除女方不孕原因及男性附睾疾病),年龄21~31(26.0±1.0)岁. 仪器: 7170全自动生化分析仪(日本HITACH公司生产),960CRT荧光分光光度计(上海分析仪器厂产品).
  1.2方法
  1.2.1精液的采集受试者禁欲3~5 d,用新洁尔灭消毒手及尿道口,以手淫法获取1次全部精液,放入一次性无菌干燥带盖塑料容器内,置37℃恒温水浴箱中,孵育30 min,待完全液化后,3000 r/min离心20 min,去除精子(用显微镜确定精液上层无精子存在). 取上层精液0.1 mL加生理盐水4.9  mL(50倍稀释)混匀,进行GGT和NO含量的测定.
  1.2.2精液常规分析取液化精液,参照WHO标准[4],由2名熟练工作人员分别进行精子计数、精子活动率、活力及形态观察,取其均值. 然后将不育男性按精子密度不同分为:<20×109/L, (20~40)×109/L和>40×109/L 3组;按精子活动率分为: <20%, 20%~40%和>40% 3个组,生育男性精子密度为(50~100)×109/L,精子活动率为60%~90% . 测其NO含量及GGT活性.
  1.2.3精液GGT活性的检测采用上海复星长征医学科学有限公司提供的Glucana为可溶性底物动力学方法试剂盒. 样品中的GGT催化底物中Lγ谷氨酰3羧基4硝基苯胺和甘氨酰甘氨酸生成谷氨酰甘氨酰甘氨酸和呈色产物5氨基2硝基苯甲酸盐,后者的速率与样品中GGT活性成正比. 取50倍稀释好的精液0.5 mL,置7170全自动生化分析仪上,设定主要分析参数,连续监测时间2.63 min,反应温度37℃,主波长405 nm,副波长660 nm ,样品量8.0 μL测定GGT,即可计算出样品中GGT的活性.

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