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依达拉奉对离体兔肺脏保存效果的实验研究

时间:2017-09-15 19:00:07 来源: 代写硕士论文

                   作者:周庆玲,孙强,徐长宪,孙金辉,孟国伟

【摘要】  目的探讨依达拉奉对离体兔肺脏保存质量的影响。方法健康大白兔12只,按照随机原则,分为LPD组(n=6)和E组(n=6)。LPD组用低钾右旋糖酐(LPD)液行肺灌洗及肺保存,E组用含依达拉奉20 mg/L的LPD液行肺灌洗及肺保存。实验结束时取肺静脉血标本作血气分析及制备血清测定丙二醛(MDA)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活性;取肺组织标本测干/湿重及送病理。结果两组肺静脉血PaO2、PaCO2、 血浆丙二醛(MDA)含量及SOD活性、肺组织干/湿重比(D/W)均无显著差异(P>0.05)。肺组织病理结果显示两组均有肺组织毛细血管轻度充血,肺泡结构尚可,肺泡间质少量粒细胞浸润,肺泡腔内轻度渗出及少量红细胞。结论在离体冷保存6 h再灌注的兔肺模型,依达拉奉未显示出明显优于低钾右旋糖酐液(LPD)的保护效果。

【关键词】  低钾右旋糖酐液;依达拉奉;肺保存

  The Effect of Edaravone on Isolated Rabbit Lung Preservation

  Abstract: OBJECTIVETo investigate the pulmonary preservation effect of Edaravone on isolated rabbit lung. METHODS12 rabbits were randomly divided into 2 groups: LPD group(n=6), lungs flushed and preserved with LPD solution;  Edaravone group(n=6): lungs flushed and preserved with LPD solution plus Edaravone 20mg/L. All lungs were reperfused with venous blood for 10 minutes after 6 hours cold preservation. Blood samples were analyzed for PO2 , PCO2 , serum MDA and SOD. Lung tissue  wet-to-dry weight ratio compared, samples of left lung tissue were sent for histologic evaluation. RESULTSPaO2 and PaCO2 levels, serum MDA and SOD, and Lung tissue D/W ratio showed no significant difference between two groups(P>0.05); histologic evaluation showed mild changes in lung tissue in both groups.CONCLUSIONLPD solution plus edaravone and LPD solution showed similar protective effects on isolated rabbit lung preservation.

  Key words:LPD solution;Edaravone;lung preservation

  自从Cooper等1983年在加拿大多伦多大学医院首次成功地为一位肺纤维化晚期患者实施了单肺移植手术[1],之后的二十余年,肺移植逐渐成为治疗终末期肺部疾患的有效手段。但是,供肺短缺、移植早期的肺缺血再灌注损伤(lung ischemia reperfusion injury)依然是限制肺移植在临床上广泛应用的主要因素。因此,如何延长器官保存时间,改善保存器官移植后功能,减轻移植器官的缺血再灌注损伤是亟需探索的重点之一。
肺缺血再灌注损伤的重要原因之一就是氧自由基形成。依达拉奉是一种自由基清除剂,通过清除自由基,抑制脂质过氧化,对多种脏器及组织的缺血再灌注损伤有保护作用。Ito等的研究发现依达拉奉对大鼠肠缺血导致的肺损伤有保护作用,能减少白细胞浸润,减轻脂质过氧化,抑制肺内致炎性细胞因子IL-6 mRNA 表达[2]。本研究在低钾右旋糖酐液(LPD)液中加入依达拉奉20mg/L,观察其对离体兔肺的保护作用。

  1材料与方法

  1.1实验动物

  健康大白兔12只,雌雄不拘,体重(3000±200)g(购于山东大学医学院实验动物中心)。
 
  1.2实验设备及试剂

  盒美国E150型纽邦(NEWPORT)呼吸机;德国产StokertⅡ体外循环机的双泵头;德国产Sartorius analytic分析天平;北京医用离心器厂生产LDZ5-2型低速离心仪;山东潍坊医药器械公司生产立鹤牌电热恒温干燥箱;福建新大陆生物技术有限公司生产722S可见光分光光度计;国产恒温水浴箱;美国雅培公司的i-STAT血气生化分析仪;.丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒以及蛋白定量测定试剂盒均购于南京建成生物工程研究所;依达拉奉(必存)注射液系江苏先声药业生产,规格10 mg/5ml,生产批号80-041101。

  1.3动物模型制备

  兔经耳缘静脉建立静脉通路,静脉注射氯胺酮2 mg/kg,氯化琥珀胆碱1 mg/kg,麻醉后仰卧位固定于手术台。颈部正中切口,气管切开插管,接E150型纽邦(NEWPORT)呼吸机辅助呼吸,吸氧浓度21%,呼吸频率40~50 次/分,潮气量15 ml/kg。兔去毛消毒,前正中线开胸,剪除纵隔胸膜,切除胸腺暴露气管,打开心包,游离上下腔静脉。肝素3 mg/kg经右心耳进行肝素化,经右室流出道插入16GA肺动脉灌注管并固定。右房插管收集自体静脉血入真空密闭储血袋, 回收血量约(150±20)ml,红细胞压积(Hct)(0.35±0.03),生理盐水稀释至Hct 0.25, 密闭保存,以备再灌注用。待心脏停跳时, 经右室流出道肺动脉插管,用置于60 cm高度、预冷4℃的肺保存液冲洗肺脏 ,同时切开左心耳引流。冲洗期间继续肺通气。灌注总量60 ml/kg,冲洗完毕,完整游离出心肺组织,吸气末结扎气管使肺处于膨胀状态,置于4℃与灌洗液相同的保护液中保存。于4℃环境中保存6 h,再行离体复灌。复灌时参照LS Wang模型[3],取出心肺组织,气管插管接呼吸机呼吸参数如同前述。固定好肺动脉灌注管,同时用滚压泵(德国StokertⅡ体外循环机的双泵头,泵管采用停跳液灌注装置的泵管,1.4 ml/转,15转/min)将自体血(预温至30℃)以20 ml/min泵入肺动脉,复灌时间10 min。实验结束时,取肺静脉血标本作血气分析及制备血清测定丙二醛(MDA)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活性;取肺组织标本测干/湿重及送病理。

  1.4实验分组及指标测定

  1.4.1实验分组LPD组(n=6):肺灌洗及肺保存均采用4℃ LPD液(成分见表1);E组(n=6):在LPD液中加入依达拉奉20 mg/L。表1LPD液及含依达拉奉LPD液的主要成分(略) 

  1.4.2 指标测定

  1.4.2.1 肺静脉血标本作血气分析

  1.4.2.2血浆丙二醛(MDA)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活性测定血标本离心取血清保存于-20℃ 冰箱中待测。采用硫代巴比妥(TBA)法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)测定SOD活性。

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