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大鼠比目鱼肌肌梭内神经末梢的快速银染方法

时间:2017-08-30 04:00:08 来源: 代写硕士论文
                 作者:朱永进,樊小力,吴苏娣,宋新爱 

【关键词】  快速银染

   摘要:目的  建立快速稳定的肌梭内神经末梢的银染方法。方法  分离出单一肌梭,对吕荣等人的运动终板及神经末梢的快速银染方法做了适当的改良,用于肌梭内神经末梢的染色。结果  肌梭赤道部与两极部神经末梢呈棕黑色,清晰可见,梭内肌纤维染为棕黄色。结论  改良的肌梭内神经末梢的快速银染方法,操作简单,神经末梢显示清晰。

  关键词:肌梭;快速银染;神经末梢

  Fast silverstaining of nerve endings of muscle spindle in rat soleus muscle

  ABSTRACT: Objective  To establish stable silverstaining method for showing nerve endings of muscle spindle in rats soleus muscle. Methods  According to argentaffine of nerve fibers, fast silverstaining was used to observe morphology of nerve endings of isolated muscle spindle in rats soleus muscle. Results  Nerve endings of muscle spindle in equatorial and polar regions were dyed black; intrafusal fibers were dyed buffy. Conclusion  Fast silverstaining can easily used to show the nerve endings of muscle spindle in rats soleus muscle.

  KEY WORDS: muscle spindle; fast silverstaining; nerve endings

  肌梭对肌紧张的产生和维持以及对随意运动的精细调节起着至关重要的作用,肌梭内神经末梢的病理改变对其生理功能有很大的影响。目前神经末梢的银染方法较多,但其染色时间均较长,且方法不稳定。在本研究中,我们对吕荣等人[1]的运动终板及神经末梢的染色法进行了适当的修改,取得了较好的效果,从而为肌梭形态结构的研究提供了实验资料。

  1  材料与方法

  1.1  实验动物  健康活泼的SpragueDawley雌性大鼠,体质量180-220g,由西安交通大学医学院实验动物中心提供。

  1.2  比目鱼肌单一肌梭标本的制备  大鼠腹腔注射戊巴比妥钠(45mg/kg),麻醉后,打开胸腔,暴露心脏,经左心室插管至主动脉,依次灌流生理盐水100mL、40g/L多聚甲醛500mL,灌流1.5h以上,至组织呈一定硬度且无血色后,取后肢比目鱼肌,并将其置于含有100g/L氯化钙的10%(体积分数)的甲醛溶液,冰箱保存过夜。将固定好的比目鱼肌标本置于玻璃板上,在双目解剖显微镜下沿肌纤维走行,用分离针仔细将比目鱼肌分离为若干条扁薄的肌片,分别采用聚光灯光源和冷光源为双目解剖显微镜和倒置显微镜照亮视野。调节双目解剖显微镜的位置,使其焦点与倒置显微镜焦点重合,在双目解剖显微镜和倒置显微镜下辨认肌梭。肌梭与梭外肌呈并联关系,以其呈梭形膨大的赤道部和较强的折光性为辨认标志。调整光源的位置,使解剖镜视野明亮度适宜,便于观察分离肌梭。用分离针去除肌梭周围相连的梭外肌纤维、血管等组织,将肌梭完整地分离出来。固定后的肌梭脆性较大,极易损伤,分离时切勿用力牵扯。肌梭在分离过程中尽量保持其形态的完整和表面的光滑,便于染色。在解剖显微镜下,将分离出的肌梭直接贴于经铬钒明胶处理过的载玻片上,并使肌梭平铺展开。

  1.3  改良的快速银染方法  肌梭标本的载玻片自然风干后,可依次进行以下步骤:80%(体积分数)的乙醇硬化5-6min后,蒸馏水冲洗2遍;50%(体积分数)的吡啶酒精,恒温箱(37℃)2-4h,蒸馏水洗去酒精吡啶液;200g/L硝酸银37℃孵育1-2h,注意避光;10%(体积分数)的中性甲醛溶液浸洗3-4次,直至见不到乳白色液为止;然后用1%(体积分数)的中性甲醛溶液洗1、2次;最后蒸馏水冲洗2遍,用滤纸吸干水滴;滴加银铵溶液2-3滴于载玻片的肌梭标本处,迅速显微镜下观察,可有淡淡的棕色,1min内将载玻片置入1%(体积分数)的中性甲醛溶液,并立即移出,镜下观察,至肌梭内黑褐色神经末梢清晰出现,此时,整个肌梭呈棕黄色;蒸馏水冲洗,入50g/L的硫代硫酸钠固定1min,常规酒精梯度脱水,二甲苯透明,树胶封片。

  2  结果

  2.1  单一肌梭整体染色效果  肌梭整体呈棕黄色(图1a),赤道部可见包囊边界清晰,梭内肌淡染为黄色,神经末梢为棕黑色,缠绕于梭内肌纤维上。

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