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银杏叶提取物EGB761对肢体制动大鼠骨骼肌萎缩的防护效应

时间:2017-07-08 08:00:04 来源: 代写硕士论文

【摘要】  目的: 探讨银杏叶提取物EGB761对废用性骨骼肌萎缩的防治作用. 方法: 选用雄性SD大鼠24只,随机分为空白组,对照组,试验组,每组8只. 大鼠右后肢用可塑性石膏由足跖管型固定至膝上1 cm处,膝关节固定于屈曲位100°,踝关节固定于跖屈60°,共4 wk. 对照组每日给予蒸馏水3 mL灌胃,试验组每日给予银杏叶提取物EGB761水溶液灌胃(灌胃剂量120 mg/kg,浓度14 g/L). 4 wk后完整解剖右后肢腓肠肌,检测腓肠肌收缩张力、肌湿重、蛋白质含量、Na+?K+?ATP酶及Ca2+?ATP酶活性. 结果: 对照组、试验组与空白组相比,腓肠肌收缩张力、肌湿重、蛋白质含量、Na+?K+?ATP酶及Ca2+?ATP 酶活性显著下降(均P<0.05). 试验组与对照组相比,试验组的上述指标显著高于对照组 (均P<0.05). 结论: 银杏叶提取物EGb761能够显著提高废用性萎缩骨骼肌的收缩张力、肌湿重、蛋白质含量、Na+?K+?ATP酶及Ca2+?ATP酶活性,从而有效的抑制骨骼肌废用性萎缩的发生.

【关键词】  制动 骨骼肌 萎缩 银杏叶提取物


  0引言

  肢体制动是骨关节病损的一种主要治疗手段,由此带来的骨骼肌废用性萎缩严重地影响了疾病的治疗和功能的康复,在某些情况下其危害性甚至超过了原发病. 废用性骨骼肌萎缩已成为患者肢体功能恢复的严重障碍,如何对其进行有效防治尤为重要. 本研究旨在观察银杏叶提取物EGB761对后肢制动后大鼠腓肠肌收缩张力、肌湿重、蛋白质含量、Na+?K+?ATP酶及Ca2+?ATP酶活性的影响,研究其对骨骼肌废用性萎缩的防护效应.

  1材料和方法

  1.1材料

  1.1.1动物及分组雄性SD大鼠24只,体质量200~260 g,由南方医科大学试验动物中心提供,随机分为空白组,对照组,试验组,每组8只.

  1.1.2主要试剂及仪器银杏叶提取物EGB761购自浙江康恩贝制药股份有限公司,考马斯亮兰蛋白检测试剂盒、ATP酶检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所,PCLab生物信号采集处理系统(VER2.2.0)操作程序由北京微信斯达科技发展有限责任公司提供.

  1.2方法

  1.2.1动物模型制备空白组进行笼内自由活动,对照组及试验组大鼠按文献[1]方法,将大鼠右后肢用可塑性石膏由足跖管型固定至膝上1 cm处,膝关节固定于屈曲位100°,踝关节固定于跖屈60°,以便小腿的肌肉保持于松弛位,共4 wk. 每日检查固定情况,随时进行调整. 石膏浸液掺入苦味酸,以防大鼠啃咬. 对照组每天给予蒸馏水3 mL灌胃,试验组每天给予银杏叶提取物EGB761水溶液(14 g/L)灌胃(120 mg/kg)[2].

  1.2.2取材4 wk后,20 g/L戊巴比妥钠腹腔内注射麻醉大鼠,完整解剖右后肢腓肠肌,坐骨神经,进行腓肠肌收缩张力检测. 然后切取腓肠肌,去除腱膜、肌腱和神经,进行湿重、蛋白含量及酶活性检测.

  1.2.3腓肠肌收缩力的测定预先运行PCLab生物信号采集处理系统,将动物牢固固定于实验台上. 取右后肢下段背侧切口,切开皮肤分离出腓肠肌,于近端分离解剖出坐骨神经,远端从肌腱止点处剪断. 用丝线将其与机械?电换能器连接,使肌肉处于最适初长度. 经预实验得知当张力为50 g时,肌肉处于最适初长度. 铂金丝电极置于坐骨神经表面. 经预实验设置单收缩刺激强度为3 V,波宽1 ms,强直刺激幅度3 V,波宽1 ms,串长2 s,首频率50 Hz. 频率增量50 Hz. 电脑可直接记录收缩曲线和测量结果.

  1.2.4肌湿重的测量将腓肠肌由起点至止点完整的切下,除去肌肉上附着的组织后,在电子天平上称其质量.

  1.2.5蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法测定肌肉总蛋白含量: 用牛血清蛋白制备标准曲线. 取各组腓肠肌组织,按肌肉∶水= 1∶9(V/V) 的比例加入生理盐水,用匀浆仪制成20 g/L肌肉匀浆. 按试剂盒要求步骤加入考马斯亮蓝染液,静置后在分光光度计上于波长595 nm处比色. 对照标准曲线求得蛋白含量.

  1.2.6Na+?K+?ATP 酶及Ca2+?ATP酶活性的测定Na+?K+?ATP 酶及Ca2+?ATP 酶活性的检测程序按照ATP酶测试盒说明书提供的方法进行. 先将每份肌肉标本分别称重,按肌肉∶水= 1∶9(V/V)的比例在每份标本中加入生理盐水,将肌肉剪碎,在玻璃匀浆管中制成100 g/L的匀浆,3000 r/min离心10 min,取上清0.2 mL加入0.8 mL生理盐水稀释成20 g/L的匀浆. 匀浆中加入酶促反应的相应试剂,混匀后,4000 r/min离心10 min,取上清200 μL定磷. 加入定磷试剂后混匀,37℃水浴30 min,冷却至室温,在分光光度计660 nm处(1 cm光径,蒸馏水调零)比色,读数. 与标准无机磷酸成色进行比较,酶活性以无机磷(pi) μmol/(mg?h)表示.

  统计学处理:用SPSS 10.0软件采用One?Way ANOVA法,各组间两两比较用LSD法.

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