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非小细胞肺癌血清及癌组织中EGFR蛋白定量检测

时间:2017-07-08 07:00:12 来源: 代写硕士论文
【摘要】  目的: 探讨EGFR蛋白定量水平与非小细胞肺癌(NSCLC)的临床生物学行为及预后的关系. 方法: 采用双抗体夹心ELISA法定量检测30例NSCLC患者及17例良性肺疾病和健康对照者血清和组织中EGFR蛋白水平. 结果: 30例NSCLC患者血清和癌组织中EGFR蛋白水平升高(P<0.01),且EGFR蛋白水平与NSCLC患者TNM分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05). 但NSCLC患者术前血清EGFR蛋白水平与术后3 d及10 d的血清水平无统计学差异(P>0.05). 结论: EGFR蛋白水平与NSCLC的发生、发展和转移密切相关,血清EGFR蛋白水平可作为评估NSCLC进展、复发和预后的有价值指标. 
【关键词】  癌 非小细胞肺 受体 表皮生长因子 酶联免疫吸附测定
  0 引言
  近年来全球肺癌的发病率和死亡率迅速上升,在许多国家和地区跃居各种肿瘤之首. 随着分子生物遗传学研究的深入,人们试图用分子手段去预防、诊断和治疗肺癌. 表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)及其信号传导通路是目前研究较多的分子靶点,其信号传导通路的异常在肿瘤的发生、发展中起着重要的介导作用,以EGFR信号传导通路为靶点的抗癌治疗也已取得令人瞩目的效果. 然而目前对于EGFR与非小细胞肺癌(NSCLC)临床生物学行为及预后的关系等方面的认识仍有争论,且EGFR在非小细胞肺癌患者血清中的含量少见报道,在非小细胞肺癌组织中的含量未见报道. 因此,本研究采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测非小细胞肺癌患者手术前后血清及癌组织中EGFR蛋白含量,探讨非小细胞肺癌组织和血清中EGFR蛋白含量关系及其与肺癌临床病理特征的关系,为临床肺癌的诊断及治疗提供依据.
  1对象和方法
  1.1对象
  选择2005?08/2006?01在西安交通大学医学院第一附属医院胸外科非小细胞肺癌行手术治疗,无肝炎、糖尿病以及免疫系统疾病等合并症的患者30(男20,女10)例,年龄45~70(平均57.78)岁;鳞癌17例,腺癌13例. 病理分期(pTNM):Ⅰ期与Ⅱ期20例,Ⅲ期10例. 另选择健康志愿者10例和肺良性病患者7例作为对照组. 抗EGFR单克隆抗体(包被抗体),EGFR标准品及辣根过氧化物酶标记的EGFR多克隆抗体(酶标抗体)均购自武汉博士德生物工程有限公司. 包被缓冲液,酶结合抗体缓冲液,匀浆介质,牛血清清蛋白(BSA),考马斯亮兰G?250染料均由西安交通大学医学院免疫教研室提供. 底物显色液及反应中止液由深圳晶美生物工程有限公司生产.
  1.2方法
  1.2.1标本制备抽取良性病例组及肺癌病例组术前1 d、术后3 d及术后10 d清晨空腹静脉血2 mL,分离血清,低温(-80℃)冻存待检. 另外,良性病例组及肺癌病例组均于手术当日切取病变组织,称重后制作成组织匀浆待检.
  1.2.2结果判定根据EGFR标准品不同浓度及其对应的吸光度(A值)制作标准曲线,计算回归方程,得出EGFR浓度与吸光度之间的直线方程,再根据样本的吸光度,利用回归方程计算出样本中EGFR浓度. 血清样本中EGFR浓度再乘以稀释倍数,得出最终结果,单位为μg/L. 组织匀浆样本中EGFR浓度再除以各组织匀浆样本总蛋白的浓度,得出单位重量组织匀浆样本中EGFR浓度,单位为μg/g.
  统计学处理:用SPSS13.0软件包进行统计学处理. 考马斯亮兰法和ELISA检测的标准曲线通过直线回归分析获得. 数据采用x±s表示,组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD?t检验,两变量关系研究采用相关性分析法. P<0.05为差异有统计学意义.
  2结果
  2.1NSCLC和良性病例及健康对照组术前血清中EGFR含量的比较NSCLC和良性病例及健康对照组术前血清EGFR含量分别为16.4±3.6,9.2±3.8和9.0±2.4 μg/L,3组之间EGFR含量有统计学差异(P<0.05).
  2.2NSCLC和良性病例组组织匀浆中EGFR含量的比较NSCLC组和良性病例组组织匀浆中EGFR含量分别为93±23,64±19 μg/g,有统计学差异(P<0.05).
  2.3NSCLC患者术前血清及癌组织匀浆中EGFR含量与肺癌病理特征的关系NSCLC患者术前血清及癌组织匀浆中EGFR含量与有否淋巴结转移及TNM分期之间有统计学差异(P<0.05),与肿瘤大小、细胞分化程度之间无统计学差异(P>0.05,表1).
  2.4NSCLC和肺良性病患者术前及术后血清中EGFR含量的动态变化NSCLC患者术前1 d、术后3 d及术后10 d血清中EGFR含量分别为16±3,16±3和15±3.2 μg/L,术前1 d与术后3 d及术后10 d相比无统计学差异(P=0.635). 术后10 d血清中EGFR含量与良性病例组及健康对照组血清中EGFR含量之间仍存在统计学差异(P=0.043).表1NSCLC患者术前血清及癌组织匀浆中EGFR含量与肺癌病理特征的关系(略)
  2.5NSCLC患者术前血清中EGFR含量与癌组织匀浆中EGFR含量的相关性通过相关性分析,NSCLC患者术前血清中EGFR含量与肺癌组织匀浆中EGFR含量具有相关性,其相关系数为0.845(P<0.01),说明两者之间呈正相关.
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