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EMMPRIN和MMP?2的表达与大肠癌临床病理学的关系及意义

时间:2017-07-08 07:00:08 来源: 代写硕士论文

【摘要】  目的: 探讨大肠癌组织EMMPRIN和MMP?2蛋白的表达意义. 方法: 大肠癌患者108例,以正常结、大肠黏膜30例作为对照,应用SABC免疫组化方法检测EMMPRIN和MMP?2蛋白的表达. 结果: 大肠癌组织EMMPRIN和MMP2蛋白的阳性表达率分别为81.5%(88/108) 和86.1%(93/108),明显高于正常大肠黏膜组织(6.7%和20.0%,P<0.01). EMMPRIN和MMP2在中、低分化癌中的强阳性表达率高于高分化癌(P<0.05);浆膜浸润及淋巴结转移组的强阳性率高于无浸润及淋巴结转移组(P<0.01);Dukes C~D 期的强阳性表达率高于Dukes A~B 期(P<0.01). EMMPRIN和MMP2的表达一致率为91.4%(85/93),Spearman 等级相关性检验分析表明大肠癌组织中EMMPRIN的表达和MMP2的表达之间呈正相关(r=0.608,P<0.01). 结论: EMMPRIN和MMP?2与大肠癌的发生、浸润、转移有关,可作为新的大肠癌标记物用于联合检测,具有重要的临床意义.

【关键词】  EMMPRIN 明胶酶A 结肠肿瘤 病理学 临床

  0引言

  大肠癌是消化道的常见恶性肿瘤之一,临床上多根据肿瘤大小、淋巴结转移情况、病理学分期及组织学分级,来判断其病程及预后. 近年来,随着分子生物学技术的迅速发展,许多蛋白质分子标记物已被用于恶性肿瘤的诊断. 恶性肿瘤的侵袭生长是瘤细胞、宿主细胞及细胞外基质(extracellular matrix, ECM)之间涉及到信号传导、基因、酶类及ECM 等多方面因素的一系列复杂、多步骤相互作用的结果. 在整个侵袭过程中,蛋白酶对ECM 的降解是瘤细胞侵袭转移的关键[1-2]. 其中,基质金属蛋白酶类(MMPs)在细胞外基质降解过程中起了主导作用[3]. 而细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)在恶性肿瘤细胞膜上有较强的表达;它能诱导MMPs在肿瘤细胞表面的表达和活化,因此瘤细胞可通过其表面的EMMPRIN 分子作用邻近的正常细胞,使其表达并分泌MMPs,降解细胞外基质,从而促进肿瘤的侵袭与转移[4-5]. 我们应用免疫组织化学方法检测了大肠癌组织中EMMPRIN和MMP?2蛋白的表达,探讨二者与大肠癌临床病理学的关系及其临床意义.

  1对象和方法

  1.1对象

  2005?01/2007?12大肠癌手术标本108(男65,女43)例;年龄42.6±11.8(30~75)岁. 全部获病理学诊断. 患者术前均未行化学治疗或放疗. 另取正常直、结肠黏膜组织30例作对照.108例大肠癌患者中高中分化腺癌80 例,低分化腺癌28例;有浆膜浸润者49例,无浆膜浸润者59例;有淋巴结转移者48例,无淋巴结转移者60例; DukesA~B 期58例, C~D 期50例.

  1.2方法

  采用免疫组织化学染色SABC法,鼠抗人EMMPRIN mAb(工作浓度1∶100)、鼠抗人MMP?2 mAb(工作浓度1∶50)和链霉菌抗生素蛋白?过氧化物酶法染色试剂盒均为Santa Cruz 公司生产,购自北京中山生物技术有限公司. 标本经40 g/L中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,4μm 连续切片,70℃烤片15 min,梯度乙醇脱水,30 mL/L H2O2灭活内源酶,PBS 漂洗5 min×3次. 正常羊血清室温孵育15 min. 滴加20~30 μL PBS 稀释的一抗,4℃过夜. PBS 漂洗5 min×3 次. 二抗、三抗依次37℃孵育45 min,PBS 漂洗5 min×3次. DAB显色5~10 min,自来水充分洗涤,苏木素复染5 min,稀盐酸淡化30 s,冲洗5 min. 脱水、透明、封片,镜检. 阴、阳性对照均常规处理. EMMPRIN蛋白表达阳性为细胞膜和细胞质出现棕黄色颗粒. MMP?2的阳性表达是在细胞膜上出现棕褐色颗粒. 根据显色强度和范围分为[6-7]阴性(-),阳性细胞数<5%;弱阳性(+),阳性细胞数占5%~25%;中等阳性(?),阳性细胞数占25%~50%;强阳性(?),阳性细胞数>50%.
 
  统计学处理:所有数据用SPSS13.0处理, 计量资料均用x±s形式表示;对于2×2四格表资料采用Fisher?s exact test分析,非四格表资料采用χ2检验. Spearman 等级相关性检验分析EMMPRIN和MMP?2蛋白的表达相关性. P<0.05为差异具有统计学意义.

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