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安肾胶囊对膜性肾病大鼠治疗作用的实验研究

时间:2017-07-05 21:00:04 来源: 代写硕士论文

【摘要】  目的:研究安肾胶囊对膜性肾病大鼠的治疗作用及机理。方法:将50只SD雄性大鼠制成膜性肾病大鼠模型,然后按24 h尿蛋白定量结果随机分为模型组、雷公藤多苷组、安肾胶囊高、中、低剂量组(n=10),另外将10只未造模大鼠作为正常组。将各组大鼠分别灌胃4 w后,观察各组大鼠尿蛋白定量、血尿程度及肾脏组织病理学改变。结果:与模型组比较,安肾胶囊高、中、低剂量组和雷公藤多苷组大鼠的24 h尿蛋白定量降低、血尿减轻、肾脏组织病变减轻。结论:安肾胶囊对膜性肾病大鼠具有降低蛋白尿、控制血尿、修复肾小球病理损伤的作用,这可能是其治疗膜性肾病大鼠的作用机制。

【关键词】  安肾胶囊 膜性肾病 难治性肾病综合征 实验研究

   安肾胶囊根据难治性肾病反复发作、病程长久、对激素依赖或使用激素治疗无效的特点创立,主要用于难治性肾病痰瘀互结证。本实验采用膜性肾病大鼠模型,运用安肾胶囊治疗,通过观察各指标的改变,研究本方药对肾病大鼠的治疗作用和机理。

    1   材料与方法

    1.1   实验材料

    1.1.1   实验动物   SD雄性大鼠,体重(150±30)g,由国家药品监督管理局四川抗菌素工业研究所实验动物中心提供。实验期间饲养于室温(20±3)℃环境,相对湿度:70%,12 h光、12 h暗的条件下,自由摄食全价大颗粒,饮水,驯养1 w后使用。

    1.1.2   药品及试剂   安肾胶囊浸膏:由成都中医药大学附属医院药厂提供,棕褐色浸膏,每毫升含生药3 g。雷公藤多苷片:湖南省株洲市制药三厂生产,批号:066002,10 mg/片。阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)、弗氏不完全佐剂:由四川大学华西医学中心提供。磺柳酸法试剂:成都中医药大学附属医院检验科自配。Buin's固定液、磷酸缓冲液(PBS)和2.5%戊二醛固定液:成都中医药大学附属医院药理研究室提供。

    1.2   实验方法

    1.2.1   造模   参照黄小平等[1]报告的大鼠原位性肾小球肾炎模型制作方法:取雄性SD大鼠70只,放入大鼠代谢笼中(每笼1只),收取大鼠24 h尿液,作常规测定。选取小便正常大鼠作为受试动物,除随机抽取10只作正常组外,其余50只大鼠均制成膜性肾病模型:(1)预免疫:取1 mL浓度为2 mg/mL的C-BSA溶液与弗氏不完全佐剂混匀的乳白色悬液,分别一次性于每只大鼠的双侧腋下、腹股沟处作多点皮下注射,观察1 w。(2)免疫:预免疫结束1 w后,每只大鼠尾静脉注射1 mL浓度为2.5 mg/mL C-BSA,每周3次,共3 w。整个造模时间共4 w,造模完成后取所有实验动物24 h尿液作24 h尿蛋白定量测定,根据检测结果进行分组。

    1.2.2   分组   将造模后的50只大鼠,按24 h尿蛋白定量结果随机分5组,分别为模型组、安肾胶囊高剂量组(高剂量组)、安肾胶囊中剂量组(中剂量组)、安肾胶囊低剂量组(低剂量组)、阳性药物对照组即雷公藤多苷组。另外将10只同批大鼠作为正常组。

    1.2.3   给药   造模4 w分组后灌胃,具体如下:正常组、模型组:每天灌服等容量(1 mL/100 g)的蒸馏水。安肾胶囊高、中、低剂量组:每天灌服剂量分别为5 g/kg、2.5 g/kg、1.25 g/kg的安肾胶囊混悬液。雷公藤多苷组:每天灌服剂量为0.03 g/kg的雷公藤多苷片混悬液。每天灌胃1次,连续4 w,大鼠每周称重1次,根据体重调整给药剂量。

    1.2.4   指标观察及检测方法

    1.2.4.1   24 h尿蛋白定量观察:收集大鼠24 h尿液,用磺柳酸法测定尿蛋白含量,24 h尿蛋白定量=尿蛋白含量/L×24 h尿量。

    1.2.4.2   血尿检测:收集每只大鼠24 h尿液,离心取上清液,采用H-100全自动尿液分析仪检测。

    1.2.4.3   肾脏组织形态学变化:灌胃4 w后,将大鼠断头处死,立即分离肾脏,观察肾脏外观形态。随机间隔取材,取1个肾脏经肾门均匀纵切,随机间隔取样2块置于Bouins液中固定,逐级乙醇脱水,浸蜡,石蜡包埋,常规切片5 μm 2张,经“PAS+苏木精”染色,常规光镜观察,另1个肾脏经肾门最大面均匀切取1/6,置于2.5%戊二醛中固定,送检经透射电镜观察、照相。

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